一、實(shí)驗(yàn)原理
真核生物的一切有核細(xì)胞都能用來(lái)制備基因組 DNA。真核生物的DNA是以染色體的形式存在于細(xì)胞核內(nèi)，因此，制備DNA的原則是既要將DNA與蛋白質(zhì)、脂類和糖類等分離，又要保持DNA分子的完整。提取DNA的一般過(guò)程是將分散好的組織細(xì)胞在含SDS（十二烷基硫酸鈉）和蛋白酶K的溶劑中消化分解蛋白質(zhì)，再用酚和氯仿/異戊醇抽提分離蛋白質(zhì)，得到的DNA溶劑經(jīng)乙醇沉淀使DNA從溶劑中析出。
蛋白酶K的重要特性是能在SDS和EDTA存在下保持很高的活性。在勻漿后提取DNA的反應(yīng)體系中，SDS可破壞細(xì)胞膜、核膜，并使組織蛋白與DNA分離，EDTA則抑制細(xì)胞中Dnase的活性；而蛋白酶K可將蛋白質(zhì)降解成小肽或氨基酸，使DNA分子完整地分離出來(lái)。
二、儀器及試劑
1. 儀器：
恒溫水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、紫外分光光度計(jì)、移液器、玻璃勻漿器、離心管（**）、吸頭（**）
2. 試劑：
（1）細(xì)胞裂解緩沖液：
Tris (pH8.0) 100 mmol/L
EDTA (pH 8.0) 500 mmol/L
NaCL 20 mmol/L
SDS 10%
胰RNA酶 20ug/ml
（2）蛋白酶K：稱取20mg蛋白酶k溶于1ml**的雙蒸水中，?C20℃?zhèn)溆谩?

（3）TE緩沖液（pH 8.0）：高壓**，室溫貯存。

（4）酚：氯仿：異戊醇（25:24:1）、

（5）異丙醇、冷無(wú)水乙醇、70%乙醇、**水。
三、操作步驟
1. 取新鮮或冰凍動(dòng)物組織塊0.1g（0.5cm3），盡量剪碎。置于玻璃勻漿器中，加入1ml的細(xì)胞裂解緩沖液勻漿至不見(jiàn)組織塊，轉(zhuǎn)入1.5ml 離心管中，加入蛋白酶K 
（500ug/ml）20μl，混勻。在65℃恒溫水浴鍋中水浴30min，也可轉(zhuǎn)入37℃水浴12～24h，間歇振蕩離心管數(shù)次。于臺(tái)式離心機(jī)以12000 rpm離心5min，取上清液入另一離心管中。
2.加2倍體積異丙醇，倒轉(zhuǎn)混勻后，可以看見(jiàn)絲狀物，用100ul 吸頭挑出，涼干，用200ul TE 重新溶解。3.加等量的酚：氯仿：異戊醇振蕩混勻，離心12000 rpm，5min。
4.取上層溶劑至另一管，加入等體積的氯仿?異戊醇，振蕩混勻，離心12000 rpm，5min。
5. 取上層溶劑至另一管，加入1/2體積的7.5mol/L乙酸氨加入2倍體積的無(wú)水乙醇，混勻后室溫沉淀2min ，離心12000 rpm ,10min。
6.小心倒掉上清液，將離心管倒置于吸水紙上，將附于管壁的殘余液滴除掉。
7.用1ml 70%乙醇洗滌沉淀物1次，離心12000 rpm ， 5min。
8.小心倒掉上清液，將離心管倒置于吸水紙上，將附于管壁的殘余液滴除掉，室溫干燥。

9.加200ul TE重新溶解沉淀物，然后置于4℃或?C20℃保存?zhèn)溆谩?
10.吸取適量樣品于GeneQuant上檢測(cè)濃度和純度。